概述：甜美素是食物出产中常用的甜味增添剂，其甜度是蔗糖的30～40倍,节制限量对人们的身材安康有首要意思。《GB 2760-2014 食物增添剂利用规范》顶用于界定食物增添剂利用规模的食物分类体系，白酒属于蒸馏酒，不许可利用甜美素。本体例参照GB/T 5009.97-2003及相干文献资料，对白酒中的甜美素经提取后，在冰浴前提下，与亚硝酸钠产生重氮化反映天生衍生物环己醇亚硝酸酯，衍生物进入气相色谱质谱联用仪停止分手检测。
1 尝试局部
1.1 仪器与试剂
ꦅ
江(jiang)苏天瑞仪器股分无限公(gong)司气(qi)相色谱(pu)-质谱(pu)联用(yong)仪：GC-MS 68💟00
甜美素规范储蓄溶液：称取必然量的甜美素规范品（纯度为99.0％）于枯燥容量瓶中，用水配成1000mｇ/kg规范储蓄溶液。
试剂均为优级纯，尝试用水为二次蒸馏水。
1.2 仪器任务前提
1.2.1
气相色谱前提
DB-5毛细管色谱（30m ×0.25mm,0.25um）；载气：氦气（纯度为99.999％），载气流量1.0mL/min；进样口温度250℃，进样量1.0uL，进样体例为分流进样,分流比10:1；法式升温：初始温度为40℃，坚持时候10min，以25℃/min速度升至270℃，坚持时候5min。
1.2.2
质谱前提
电子轰击离子源（EI），四级杆温度150℃，接口温度280℃；收罗体例为挑选离子监测扫描（SIM），溶剂提早时候6min,挑选3个监测离子质荷比（m/z）为55,81,83。
1.3 尝试体例（略）
2 成果与会商
2.1 特点和离子的挑选
甜美(mei)素的首(shou)要衍生物环(hu🍸an)己醇(chun)亚硝酸酯作为(wei)定(ding)性和定(ding)量，如(ru)图(tu)1。保(bao)留时候8.511min.定(ding)性离子（m/z）为(wei)55,81,83。定(ding)量离子为(wei)5𓆏5。质谱图(tu)见图(tu)2.
图1、甜美可人素并衍生物在总阴离子流色谱图
Figure 1、 Cyclama🥃te de💯rivatives total ion
chromatogram
图(tu)2、可爱素随(sui)之出现物的质谱图(tu)
Figure 2、 Cyclamate derivative spectrum
图3、甜蜜素(su)ip产(chan)业(ye)物(wu)在SIM扫码下的(d🦋e)阴(yin)离子流色谱图
Figure 3、 Cyclamate
deri♋vative SIM under scanning ion chromatogram
图4、清纯素ꦍ衍生(sheng)产(chan)品(pin)物在SIM检测(ce)下(🌼xia)的质谱图
Figure 4、ꦅ Cyclamate derivative SIM
under scanning spectrum
2.2 前处置前提挑选
2.2.1 研究情况下调选
精确吸收的1ml甜美素储蓄液溶液根据上述衍生步骤停止衍生化，甜美素衍生物浓度为200ug/mL，衍生反映时候别离设置为10min、20min、30min、40min、50min，考查反映时候对反映的影响。成果标明，跟着时候从10min升至30min，衍生物旌旗灯号呼应值逐步增添，跟着反映时候的耽误，呼应值反而呈现下降，是以，衍生反映温度30min最好。
2.2.2
硫酸浓度的挑选
精确吸收的1mL甜美素储蓄液溶液根据上述衍生步骤停止衍生化，甜美素衍生物浓度为200ug/mL，冰浴反映前提下，插手50g/L的亚硝酸钠和别离为50g/L，75g/L，100g/L，125g/L，150g/L。成果标明，酸度从50g/L至100g/L，反映衍生物旌旗灯号呼应值较着增添，浓度降低时，呼应值呈现削减，是以，终究衍生反映酸度为100g/L。
2.2.3 亚硝酸钠浓度对衍生反映的影响
精确吸收的1ml甜美素储蓄液溶液根据上述衍生步骤停止衍生化衍生化，甜美素衍生物浓度为200ug/mL，冰浴反映前提下，插手100g/L的硫酸，和别离为30g/L，50g/L，70g/L，90g/L亚硝酸钠。成果标明，酸度从30g/L至50g/L，反映衍生物旌旗灯号呼应值较着增添，浓度降低时，呼应值呈现削减，是以，终究亚硝酸钠衍生反映为50g/L。
3 尝试数据
3.1 紧密度和反复性尝试
精确移取储蓄液500uL于离(li)心管(guan)中，用水定(ding)容20mL根据上述标(biao)样衍生(sheng)步骤停(ting)止衍生(sheng)化，衍生(sheng)物浓度为100ug/mL，平行制备反(fan)映液6次，用GC♔-MS测定(ding)。考查衍生(sheng)体例的(de)重(zhong)现性和组分保留时候和峰面积(ji)(ji)的(de)绝对规范误差，6个平行样的(de)谱。成果标(biao)明，保留时候RSD为0.98%，峰面积(ji)(ji)RSD为6.00%,，具体尝试数据以下表1所示 。
表1、对此性检验收获
Table 1, repeatable test results
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土样装备
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调取当时
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使用(yong)之(zhi)前(qian)RSD%
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峰平数
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峰面積(ji)RSD%
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1
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8.611
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0.98%
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96798
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6.00%
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2
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8.518
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99549
|
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3
|
8.406
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105518
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4
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8.431
|
99798
|
|
5
|
8.411
|
87708
|
|
6
|
8.410
|
96500
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3.2 线性干系和检测限
精确吸收浓度为10ug/mL的甜美素规范溶液10ul于50ml离心管中对应衍生物浓度别离为2ug/mL、10ug/mL、20ug/mL、100ug/mL、200ug/mL，根据上述标样衍生化步骤停止衍生化，停止线性测试。尝试所得线性方程为：y=940.43x-3525.57，线性相干系数为0.9984，如图5所示。
图5. 线性干系图
Figure 5，Linear
3.3 收受接管率测试
挑选2mg/kg、50mg/kg、200mg/kg的标样增添浓度，对某品牌白酒停止收受接管率尝试，每一个浓度别离做三次平行样，按处置样品的体例处置加标后的样品并测试，接纳外标法定量，测试成果以下表2所示。
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酸度/mg/kg
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收受接手率1/%
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收受移交率(lv)2/%
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收受收回率3/%
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光(guang)滑收受移交率(lv)/%
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2
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109.6
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104.7
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107.7
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107.3
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50
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99.84
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113.7
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103.5
|
105.7
|
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200
|
108.3
|
114.9
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116.7
|
113.3
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表2、收受接管率测试成果
Table 2, the recovery test results
3.4 现实样品测试
根据(ju)上述(shu)样(yang)(🎃yang)品(pin)处置体例对差(cha)别品(pin)类的白酒样(yang)(yang)品(pin)停止(zhi)前处置和衍生(sheng)化，利用GC-MS6800停止(zhi)测试(shi)，测试(shi)成(cheng)果以(yi)下(xia)表3所示(shi)：
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试品
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清(qing)纯素分量(liang)/mg/kg
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酒土(tu)样1
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N.D.
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酒(jiu)原辅(fu)料2
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N.D.
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酒原辅料3
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N.D.
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酒原辅料4
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N.D.
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酒(jiu)供试品5
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N.D.
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注：“N.D”表现“未检出”
表3.、酒中甜美素含量测试成果
4 论断
本尝试接纳GCMS-6800，在SIM扫描形式下对酒中的甜美素停止测试和阐发，体例不变靠得住，线性规模好，活络度高，受杂质峰的搅扰小，可以或许有用地对酒中的甜美素停止定性定量阐发。
